高效液相色谱仪
型号：1220
生产厂家：Agilent
存放地：药学院一号楼214室
仪器功能：
1、经过优化以实现更高的日常分析效率，在 QA/QC 实验室的所有常规应用中均可获得卓越的准确度和优异的精密度；
2、灵活的硬件选择和一体化配置，包括等度或梯度泵、手动进样器或样品瓶自动进样器、柱温箱和可变波长或二极管阵列检测器；
3、使用附加硬件模块（例如，InfinityLab 液相色谱系列示差折光、荧光或蒸发光散射检测器或 Agilent InfinityLab LC/MSD 系列质量选择检测器）升级系统；
4、较高的分离度和较快的运行速度：经优化的泵可提供高达 600 bar 的压力，能够使用粒径更小的色谱柱；
5、使用最高 80 Hz 的可变波长检测器降低检测限；
6、使用可选的柱温箱保持稳定的温度。
操作流程：
一、准备
1.准备所需的流动相，用合适的0.45u m滤膜过滤，超声脱气20min
2.根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱
3.配制样品（也可在平衡系统时临用配制)
4.检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常
二、开机
接通HPLC电源，按下电源开关。等待HPLC1220泵及检测器自检完毕。打开打印机（根据需要)、柱温箱（根据需要)、电脑显示器、主机电源;
1.启动EZChrom工作站:在桌面双击“LC1220(联机)”图标，进入 EZChrom 的控制界面。
2.更换流动相并排气泡
1)将溶剂瓶中管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中2)逆时针转动泵的排液阀60~90°，打开排液阀
3)点击“文件”“打开”“方法”,选择相应通路排气泡程序，如“A排气泡”或“B排气
泡”。点击“控制”“下载方法”，在“控制”“仪器状态”界面，点击梯度泵绿色“开启设备”按钮打开泵，排出管线中的气体2-3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止，查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头)。(注意：在排气泡之前一定要先打开排气阀)
4)点击“控制”“仪器状态”，点击梯度泵红色“关闭设备“按钮，关闭泵。将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
5)如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
6)如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中，设流量为5mImin，开启泵，冲洗3min后再停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。
(注意：在排气泡之前一定要先打开排气阀)
3.打开泵:点击“控制”“仪器状态”，点击该界面左侧的溶剂瓶图标，输入“实际体积、总体积、溶剂操作”等相关数据，确认即可。点击泵界面的绿色“开启设备”按钮，打开泵。
4.打开检测器的氛灯:点击“控制”“仪器状态”，在VWD检测器操作界面点击绿色“开启设备”按钮。
5.打开柱温箱（根据需要):打开柱温箱电源开关，按照分析要求设定好相应的温度。
三、方法建立及下载
1.新建方法:在EZChrom 软件内，从文件菜单依次选择“新建”“方法”，点击”确定”即出现“单元泵-VWD检测器-辅助图谱-触发器”的界面，依次对4个单元进行设定。
2.方法中梯度泵设定:在英文输入法状态下，根据试验的要求，对“流量、最小压力、最大压力、停止时间（也称为采样时间，不可点击无限制)”指标，输入相关数值，即可。(右侧的时间表，可以进行梯度设定)
3.(方法中）VWD检测器设定:在英文输入法状态下，在VWD检测器模块下，根据试验的要求，对“波长（范围:190~650nm)、停止时间（也称为采样时间，一般选择与泵一致即可)”指标，输入相关数值，即可。
4.其他模块:辅助图谱，按默认状态即可。触发器，选择“外部”控制即可。
5.方法的保存。从文件菜单依次选择“保存”“方法”，输入方法文件名，点击保存即可。
6.方法下载。根据实验需要，点击“文件”“打开”“方法”，选择需要的方法，然后从控制菜单选择“下载方法”，即可准备进行试验。
四、平衡系统，查看基线
1.在建立方法并下载方法后，点击“查看”“在线信号”，检查基线，如基线平稳，即可进行试验;如基线不符合要求，应待基线平稳才进行试验。
2.在用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
五、进样
基线平稳后，即可准备进样
1.进样前，从“控制”菜单选择“仪器状态”，在 VWD检测器操作界面下，右键单击空白处，出现快捷菜单，单击“平衡”,即对检测器调零，校正基线零点。
2.进样前，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
3.每次进样前，从“控制”菜单选择“单次运行”。输入“样品ID”选项，一般为样品名称、批号等,“数据文件”后输入<ID><D>,输入相应的结果路径。“结果名称”后输入<ID><D>。设好后，点击“开始”，，仪器进入预备状态，待仪器下方出现“正在等待触发”时，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量样品，将手动进样阀拨到“LOAD”位置，将样品注射进手动进样阀后，再将手动进样阀拨到下方，仪器进入样品采集状态。
4.界面切换。在采样过程中，可以通过左下方的“方法、序列、报告、控制（仪器状态)、视图（显示所有数据)”快捷键切换。或是通过菜单栏的“控制（仪器状态)、视图(显示所有数据)”进行切换。
六、分析结果的查看
l.如果要看当前分析的结果，可在分析菜单点击“分析”，点击“报告”“查看”“面积百分比”，显示样品检测结果报告。
2.如果要看以前分析的结果，可在“LC1220(脱机)”下查看。
(1)双击桌面上“LC1220(脱机)”；
(2)点击“文件”“打开”“方法”，选择分析所用的方法；
(3)点击“文件”“打开”“数据”，选择所要查看的数据文件；
(4)点击菜单上的“数据分析”；
(5)点击“报告”“查看”“面积百分比”，显示样品检测结果。
七、关机
（1）关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中）
（2） 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。
（3） 关闭Agilent 1260各模块电源开关。
